产地 | 上海 |
保存条件 | 密封于-20度阴凉干燥环境 |
品牌 | DUMABIO |
货号 | 电询 |
用途 | 科研实验 |
检测方法 | 电询 |
保质期 | 2年 |
适应物种 | 电询 |
检测限 | 电询 |
数量 | 1000 |
包装规格 | 1mg |
标记物 | 无 |
样本 | 电询 |
应用 | 科研实验 |
是否进口 | 否 |
鸡骨涎蛋白(BSP)酶联免疫试剂盒
ELISA 实验步骤:
1.包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC过夜,洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37oC1h,洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度)
0.1ml/孔,37oC 30分钟,洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔,37oC 40分钟,洗净。
5.显色:TMB显色
A液:四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液:5ul双氧水加蒸馏水12.5ml 。
终止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测
问:小鼠乙酰胆碱Elisa试剂盒后期数据处理中空白的OD值有什么作用?