兔Bcl2样蛋白11(Bcl2L11)酶联免疫试剂盒

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 
释。 
48μmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 
24μmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
12μmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
6μmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
3μmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl， 
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此 
重复5 次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 
7. 温育：操作同3。 
8. 洗涤：操作同5。 
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 
10 分钟. 
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 
液后15 分钟以内进行。 

一、标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一晚后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。 计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

植物细胞分裂素（Cytokinin）elisa试剂盒   再请问细胞分裂素标样用什么稀释？估计占用几个孔？每份待测样品需要提供多少体积？

答：有些方法中会用到C18柱萃取，我知道C18柱也占一定费用