猴晚期糖基化终末产物受体(AGER)ELISA试剂盒  

酶联免疫(ELISA)是如今检验科常用的免疫学检测方法之一，其操作简单，无须特殊设备，使其在各级医院都有应用。但是，如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性，因此，了解影响实验的因素，减少差错事故的发生是极其必要的。

一、CENPH ELISA Kit的基本原理不同研究领域对应的指标：
研究方向 检测指标
细胞 IFN-γ、TNF-a、IL-2、IL-6、IL-10、IL-15、IL-21、Granzyme B 、GM-CSF、BCMA、IDO、HGF……
感染/ IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、GM-CSF、CRP、IFN-β、IL-10、IL-18、MCP-1、FGF-19……
免疫/自免 IL-4、IL-5、IL-6、IL-12p70、IL-13、IL-17、IL-18、IL-21、IL-23、CXCL1、MMP-9、TNF-α、GM-CSF、G-CSF……
PD-1、PD-L1、VEGF、VEGFR2、BCMA、TGF-b、FGF-19、PDGF-BB、HGF、CD25、CD28……
心 ST2、PCSK9、ACE2、HGF、VEGF、TGF-β1、PDGF-BB、ANGPTL3、GH、CRP……
Insulin、Glucagon、Leptin、C-peptide、HGF、ACE2、VEGF、CRP……
神经科 BDNF、b-NGF、Neuropilin-1、ACE2、TGF-β1、VEGF、IL-8、MMP-9、Leptin……


二、操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。


三、应用领域

试剂盒在多个领域具有广泛的应用前景。首先，在细胞生物学研究中，科学家们可以利用该试剂盒检测不同细胞系或不同处理条件下CENPH蛋白的表达水平，进而揭示其在细胞周期调控和染色体分离等方面的作用机制。其次，在临床医学领域，该试剂盒可以诊断和预后评估等方面。

四、试剂盒组成
名称                96 孔配置         48 孔配置            备注
微孔酶标板       12 孔×8 条        12 孔×4 条          无
标准品              0.5mL               0.5mL             按说明书进行稀释
标准品稀释液      6mL                 3mL              按说明书进行稀释
样本稀释液         6mL                 3mL              按说明书进行稀释
检测抗体-HRP     6mL                 3mL                 无
20×洗涤缓冲液    20mL               20mL             按说明书进行稀释
底物 A              6mL                 3mL                  无
底物 B              6mL                 3mL                  无
终止液              6mL                 3mL                   无
封板膜              2 张                 2 张                  无
说明书              1 份                 1 份                  无
自封袋              1 个                 1 个                  无


五、本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性，该方法的主要程序为：
① 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

ELISA的类型ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：①固相的抗原或抗体，即“免疫吸附剂”（immunosorbent） ;②酶标记的抗原或抗体，称为“结合物（conjugate）;③酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。