牛肝配蛋白A受体10 (EPHA10)ELISA试剂盒

在现代生物中， 应用越来越广泛，成为研究细胞信号传导、神经发育以及形成等生物学过程的重要工具。本文将详细介绍的原理、使用步骤、注意事项以及在科研实验中的实际应用。

一、原理

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原-抗体特异性结合原理的免疫检测技术。 利用高度特异性的抗体与样本中的EPHA1蛋白结合，形成免疫复合物。然后，通过酶标记的次级抗体与免疫复合物结合， 加入底物显色，通过颜色深浅来定量检测样本中EPHA1蛋白的浓度。

二、使用步骤

1. 准备试剂和样本：按照试剂盒说明书准备所需试剂和样本，确保试剂在有效期内，样本处理正确。
2. 稀释标准品：将标准品按照一定比例稀释成不同浓度，用于绘制标准曲线。
3. 加样：在酶标板上的指定孔中分别加入标准品、待测样本和对照品，确保加样量准确。
4. 孵育：将酶标板置于37℃恒温箱中孵育一定时间，使抗原-抗体充分结合。
5. 洗涤：取出酶标板，用洗涤液洗涤数次，去除未结合的抗体和杂质。
6. 加酶标次级抗体：在洗涤后的酶标板上加入酶标次级抗体，继续孵育。
7. 再次洗涤：重复洗涤步骤，确保去除未结合的酶标次级抗体。
8. 显色：加入底物显色液，观察颜色变化，待颜色稳定后进行读数。
9. 数据分析：根据标准曲线计算待测样本中EPHA1蛋白的浓度，并进行数据分析。

三、注意事项

1. 操作前应仔细阅读试剂盒说明书，了解试剂的使用方法和注意事项。
2. 试剂应保存在规定条件下，避免过期或变质。
3. 加样时应确保加样量准确，避免误差。
4. 洗涤时应充分洗涤，去除未结合的抗体和杂质，避免干扰实验结果。
5. 显色时应控制显色时间，避免颜色过深或过浅影响读数。
6. 数据分析时应采用合适的方法，确保结果的准确性和可靠性。

四、

试剂盒组分: （保存温度4℃）

斑点ELISA
与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：
⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜 干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。
⑵ 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
⑶ 加被检血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。
⑷ 加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。
⑸显色 加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。
⑹ 结果判定 以阳性、阴险血清作为对照，膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应，否则为阴性反应。
布ELISA