牛雌激素受体α(ERα)ELISA试剂盒 

一、间接ELISA
本法主要用于检测抗体。以鸭抗体的ELISA为例，间接ELISA的操作程序如下。
⑴ 材料
① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；
② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；
③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。
⑵ 方法步骤
① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 30分钟，加终止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。
⑶ 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。
双抗体夹心

二、斑点ELISA
与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原等优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：
⑴载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后，稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中，置37℃使硝酸纤维素膜 干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40－53个样品，每个压圈可加抗原液1－20μl。
⑵ 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
⑶ 加被检血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。
⑷ 加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次。
⑸显色 加入新鲜配制的底物液，37℃反应一定时间后，去掉底物液，加蒸馏水洗涤终止反应。
⑹ 结果判定 以阳性、阴险血清作为对照，膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应，否则为阴性反应。
布ELISA

四、ELISA试剂盒组成

六、试剂盒组成
名称                96 孔配置         48 孔配置            备注
微孔酶标板       12 孔×8 条        12 孔×4 条          无
标准品              0.5mL               0.5mL             按说明书进行稀释
标准品稀释液      6mL                 3mL              按说明书进行稀释
样本稀释液         6mL                 3mL              按说明书进行稀释
检测抗体-HRP     6mL                 3mL                 无
20×洗涤缓冲液    20mL               20mL             按说明书进行稀释
底物 A              6mL                 3mL                  无
底物 B              6mL                 3mL                  无
终止液              6mL                 3mL                   无
封板膜              2 张                 2 张                  无
说明书              1 份                 1 份                  无
自封袋              1 个                 1 个                  无

七、实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒组分: （保存温度4℃）

本试剂盒用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液及其它生物体液。