人Agouti相关蛋白(AgRP)酶联免疫试剂盒

检测原理：

ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上，标本和标准品中的某蛋白与抗体结合，加入生物素化的抗某蛋白抗体，再加入SABC复合物与生物素抗体结合，形成免疫复合物，然后加入TMB显色底物，显色剂显蓝色，最候加终止液变黄色，游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值，某蛋白浓度与OD值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。

试剂盒组分: （保存温度4℃）

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第壹至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在第壹管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至 管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对照。

4.

酶免疫试验（EIA）结合光学显微镜或电子显微镜可进行抗原定位与结构的研究，用酶标记抗原或抗体结合免疫扩散及免疫电泳可提高试验的敏感性。在实际应用方面可作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。

标本收集与试剂准备:

1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）

3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第壹至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在第壹管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至 管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对照。

5. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

6. TMB显色液的配置：使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。

7. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最糕值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

ELISA试剂盒的检测范围有哪些？

比如的试剂盒检测蛋白质的浓度范围是10--100nmol/ml,而你的三个样品浓度为100，200，和300.那么你检测到的数值是一样的，都是试剂盒检测的 大值100

检测程序:

1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。

2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能:

1、 检测范围:15.6-1000ng/mL

2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体，不与其它细胞因子有交叉反应。

3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。

注意事项

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。

4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

5. 仅用于科研，不能用于临床诊断！

如您想了解更多ELISA试剂盒的报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

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5. 生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。

6. TMB显色液的配置：使用前10分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。

7. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最糕值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。

检测程序:

1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。

2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。

3. 空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。

4. 洗板：同上。

5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。

6. 洗板：同上。

7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。

8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果判断与计算：

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能:

1、 检测范围:15.6-1000ng/mL

2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体，不与其它细胞因子有交叉反应。

3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。

注意事项

1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致 度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。

4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

5. 仅用于科研，不能用于临床诊断！

如您想了解更多ELISA试剂盒的报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。

检查抗原和半抗原方面：在内分泌方面已经用于检测雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等，其敏感性与RIA相当，在血液学方面可用于检查凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、红细胞抗原及结合球蛋白（Hapto Globin）等，在肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），对前者的敏感性已达到与放射免疫试验相当的水平，但对CEA检查的敏感性较低，目前尚不能用于常规诊断，在传染病的诊断方面正在日益扩大，其中 的是用于检查乙型肝炎表面抗原。国内外已有ELISA检测的商品供应