抗凝山羊血（无菌 袋装）

注意事项:

尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。

如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。

染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。

荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。

需自备PBS。

本产品 于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤(仅供参考):

1、贴壁细胞的消化

①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。

②加入少量 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。

③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。

④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。

2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。

鉴别方法：
血液凝结析出的淡黄色通明液体。如将血液自内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反响被激活，血液敏捷凝结，构成胶冻。其周围所析出之淡黄色通明液体即为血清，也可于凝血后经离心获得。在凝血过程中，纤维蛋白原转成为纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆 大的差异。而在凝血反响中，血小板开释出很多物质，各也都发生了改变。

这些成分都留在血清中并持续发生改变，如原成为，并随血清寄存时刻逐步削减以致不见。这些也都是与血浆差异的地方。但很多未参与凝血反响的物质则与血浆根本一样。为防止抗凝剂的搅扰，血液中很多化学成分的剖析，都以血清为样品。

血清保存应该注意以下几点：
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.

(2)热灭活是指56℃,30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.

(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.

(4)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清.

(5)血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理.显微镜下小黑点:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象小黑点,常误认为血清受污染.一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清.

(6)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量.

抗凝山羊血（无菌 袋装）

用法

血清由冰冻状态在常温下完全融化成液体,摇均匀后放置 10-30 分钟待结块蛋白质沉底后即可使用。

注意事项

有少量蛋白质结块析出不影响使用。未融化或融化未经摇匀的血清禁止直接放入高温水浴内加温。减少血清重复冻融。血清在室温或 4 ℃ 冰箱内放置过久会影响促细胞生长效果。

解冻

将血清从冰冻区中取出后(切勿直接将血清从 -20 ℃ 进入 37 ℃ 解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),先置于 2 ~ 8 ℃ 区域中使之融化,然后在室温下使之全融。使用前再预温到将使用的温度(如 37 ℃ ),但必须注意的是,解冻过程中应轻轻地摇晃均匀。血清在解冻过程中可能会出现少量絮状或片状析出物,主要是血清中脂蛋白的变性或是纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出,但这些析出物,并不影响血清本身的质量。 若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

细胞培养的优点:

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

质量标准

血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定。

1． 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。

2． 有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。

3． 证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。

4． 血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。

5． 无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。

6． 对细胞有良好的支持繁殖作用

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