产地 | 上海 |
保存条件 | 2-8℃ |
品牌 | DUMABIO |
货号 | 电询 |
用途 | 科研与实验 |
检测方法 | 吸附测定法 |
保质期 | 6个月 |
适应物种 | 豚鼠 |
检测限 | 豚鼠 |
数量 | 1000 |
包装规格 | 96T/48T |
标记物 | 无 |
样本 | 血清,细胞,细胞上清液、体液等 |
应用 | 科研试剂 |
是否进口 | 否 |
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基本原理标记方法
良好的酶结合物取决于两个条件:即高效价的抗体和高活性的酶。抗体的活性和纯度对制备标记抗体至关重要,因为特异性免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。在酶标记过程中,抗体的活性有所降低,故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白, 使用亲和层析提纯的抗体,可提高敏感性,而且可稀释使用,减少非特异性吸附。
酶与抗体交联,常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室温放置30分钟后加入含5g纯化抗体的水溶液1ml,混匀并装透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时(或过夜)使之结合,然后吸出,加硼氢化钠(NaBH4)溶液(5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小时,将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液,置4℃冰箱30分钟后离心,将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中,并对之透析过夜(4℃),次日离心除去不溶物,即得到酶标抗体,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,进行测定后,冷冻干燥或低温保存。
效果测定
测定内容包括酶和抗体活性、结合物中酶含量和IgG含量、酶与IgG摩尔比值以及结合率。
⑴ 酶与抗体的活性 常用琼脂扩散或免疫电泳法,使抗原与抗体形成沉淀线,经PBS漂洗1天,再以蒸馏水浸泡1小时,将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色,如果出现应有的颜色反应,再用生理盐水浸泡,颜色仍然不褪,表示结合物既有酶的活性,也有抗体活性。良好的结合物在显色后,琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以ELISA方法进行方阵滴定,此法不仅可以测定标记效果,还可以确定酶标抗体的使用浓度。
⑵ 结合物的定量测定 一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定,然后按下列公式计算:
酶量(mg/ml)=OD403×0.42
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.4)×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量,按下列公式计算:
IgG量(mg/ml)=(OD280-OD403×0.34)×0.62
已知酶量和IgG量后,即可计算出标记抗体的摩尔(mol)比值。
HRP/IgG摩尔比值=HRP(mg/ml)/IgG(mg/ml)×4
结合物中酶总量=HRP(mg/ml)×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×
用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般,为500(g/ml时效果较好,达 1000(g/ml时效果 。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠,所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般,1.0时效果较好,1.5-2.0时 。酶结合率为 7%时效果一般,为9%-10%较好,达30%以上时 。
系从小牛肠粘膜和大肠杆菌中提取,由多个同功酶组成。它们的底物种类很多,常用者为硝基苯磷酸盐,廉价无毒性。酶解产物呈黄色,可溶, 吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反应系统中,37℃1分钟水解1μg磷酸苯二钠为一个单位。
一、纳米颗粒分析的特点
纳米颗粒分析是一种先进的检测技术,主要用于研究纳米尺度的物质性质和行为。其特点主要表现在以下几个方面:
1. 高灵敏度:纳米颗粒分析可以检测到极低浓度的纳米颗粒,从而实现对纳米材料的 测量和分析。
2. 多样性:纳米颗粒分析可以针对不同性质的纳米颗粒进行检测,包括金属、半导体、聚合物等,从而为材料科学、医学等领域的研究提供有力支持。
3. 原位实时性:纳米颗粒分析可以在不破坏样品的情况下进行原位实时检测,从而更好地了解纳米材料在实际应用中的性能和变化。
4. 操作简便:纳米颗粒分析的实验操作相对简单,可以快速获得实验结果,为科研和生产提供便利。
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二、纳米颗粒分析的优点
1. 度高:纳米颗粒分析技术可以对纳米材料进行 的测量和分析,从而为科学研究提供可靠的数据支持。
2. 适用范围广:纳米颗粒分析可以应用于不同领域的研究,如材料科学、医学、环境科学等,从而为这些领域的发展提供有力支持。
3. 实验周期短:纳米颗粒分析的实验操作相对简单,可以快速获得实验结果,缩短实验周期,提高科研效率。
4. 可重复性好:纳米颗粒分析技术具有很好的可重复性,实验结果可靠,有利于科学研究的规范化和标准化。
三、纳米颗粒分析的缺点
1. 设备成本高:纳米颗粒分析需要高精度的实验设备和仪器,导致设备成本较高,增加了研究的成本负担。
2. 数据分析复杂:由于纳米颗粒分析涉及大量的数据采集和处理,数据分析过程较为复杂,需要专业人员进行数据处理和分析。
3. 对环境和样品要求高:纳米颗粒分析需要严格的实验条件和环境控制,同时对样品的要求也比较高,对于某些特殊样品的分析可能会存在困难。
4. 技术更新快:随着科学技术的不断发展,纳米颗粒分析技术也在不断更新和完善。因此,研究人员需要不断跟进 的技术进展,以便更好地应用该技术进行科学研究。
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