显色是ELISA实验中的重要步骤，其目的是通过酶促反应将无色的底物转化为有色的产物，从而实现对目标分子的定量或定性检测。在显色过程中，酶的催化作用将无色的底物转化为有色的产物，这可以通过肉眼观察或使用仪器进行检测。

在显色过程中，需要注意以下几点：

1. 温度控制：显色反应需要在一定的温度下进行，通常在室温下进行，也可以根据需要进行加热。温度对酶促反应的影响很大，过高或过低的温度都会影响反应效果。
2. 底物浓度：底物浓度的选择对显色反应的效果也有很大影响。如果底物浓度过高，会导致反应过快，难以控制；如果底物浓度过低，则反应速度会变慢，影响实验的准确性。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。
3. 酶的活性：酶的活性对显色反应的效果至关重要。如果酶的活性不足，会导致反应速度变慢，影响实验的准确性；如果酶的活性过高，则会导致反应过快，难以控制。因此，在实验前需要对酶的活性进行检测和调整。
4. 终止液的选择：在显色反应结束后，需要加入终止液来停止反应。终止液的选择对实验结果也有很大影响。如果选择不合适的终止液，会导致实验结果不准确或出现偏差。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。

二、终止

终止是ELISA实验中的另一个重要步骤，其目的是停止显色反应，使实验结果得以稳定和固定。在终止过程中，需要注意以下几点：

1. 终止剂的选择：终止剂的选择对实验结果有很大影响。不同的终止剂会对显色反应产生不同的影响，因此需要根据实验的具体情况进行选择。常用的终止剂有硫酸、盐酸、氢氧化钠等。
2. 终止剂的浓度：终止剂的浓度也会影响实验结果。如果浓度过高，可能会导致实验结果偏低；如果浓度过低，则可能会导致实验结果偏高。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。
3. 终止时间：终止时间的选择也会影响实验结果。如果过早加入终止剂，可能会导致反应未完全停止，影响实验的准确性；如果过晚加入终止剂，则可能会导致实验结果不稳定或出现偏差。因此，需要根据实验的具体情况进行选择。

总的来说，显色和终止是ELISA实验操作中的重要步骤，需要仔细操作和掌握。通过控制实验条件和选择合适的试剂，可以获得准确的实验结果，为生物学和提供可靠的数据支持。

操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是 加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。