产地 | 上海 |
保存条件 | 2-8℃ |
品牌 | DUMABIO |
货号 | 电询 |
用途 | 科研与实验 |
检测方法 | 吸附测定法 |
保质期 | 6个月 |
适应物种 | 牛 |
检测限 | 牛 |
数量 | 1000 |
包装规格 | 96T/48T |
标记物 | 无 |
样本 | 血清,细胞,细胞上清液、体液等 |
应用 | 科研试剂 |
是否进口 | 否 |
在生物学和中,酶联免疫吸附实验(ELISA)是一种常用的检测技术,用于检测和定量各种生物分子,如蛋白质、抗体和抗原等。ELISA实验操作包括许多步骤,其中显色和终止是实验过程中的关键环节。
显色是ELISA实验中的重要步骤,其目的是通过酶促反应将无色的底物转化为有色的产物,从而实现对目标分子的定量或定性检测。在显色过程中,酶的催化作用将无色的底物转化为有色的产物,这可以通过肉眼观察或使用仪器进行检测。
在显色过程中,需要注意以下几点:
1. 温度控制:显色反应需要在一定的温度下进行,通常在室温下进行,也可以根据需要进行加热。温度对酶促反应的影响很大,过高或过低的温度都会影响反应效果。
2. 底物浓度:底物浓度的选择对显色反应的效果也有很大影响。如果底物浓度过高,会导致反应过快,难以控制;如果底物浓度过低,则反应速度会变慢,影响实验的准确性。因此,需要根据实验的具体情况进行选择。
3. 酶的活性:酶的活性对显色反应的效果至关重要。如果酶的活性不足,会导致反应速度变慢,影响实验的准确性;如果酶的活性过高,则会导致反应过快,难以控制。因此,在实验前需要对酶的活性进行检测和调整。
4. 终止液的选择:在显色反应结束后,需要加入终止液来停止反应。终止液的选择对实验结果也有很大影响。如果选择不合适的终止液,会导致实验结果不准确或出现偏差。因此,需要根据实验的具体情况进行选择。
二、终止
终止是ELISA实验中的另一个重要步骤,其目的是停止显色反应,使实验结果得以稳定和固定。在终止过程中,需要注意以下几点:
1. 终止剂的选择:终止剂的选择对实验结果有很大影响。不同的终止剂会对显色反应产生不同的影响,因此需要根据实验的具体情况进行选择。常用的终止剂有硫酸、盐酸、氢氧化钠等。
2. 终止剂的浓度:终止剂的浓度也会影响实验结果。如果浓度过高,可能会导致实验结果偏低;如果浓度过低,则可能会导致实验结果偏高。因此,需要根据实验的具体情况进行选择。
3. 终止时间:终止时间的选择也会影响实验结果。如果过早加入终止剂,可能会导致反应未完全停止,影响实验的准确性;如果过晚加入终止剂,则可能会导致实验结果不稳定或出现偏差。因此,需要根据实验的具体情况进行选择。
总的来说,显色和终止是ELISA实验操作中的重要步骤,需要仔细操作和掌握。通过控制实验条件和选择合适的试剂,可以获得准确的实验结果,为生物学和提供可靠的数据支持。
酶联免疫(ELISA)是如今检验科常用的免疫学检测方法之一,其操作简单,无须特殊设备,使其在各级医院都有应用。但是,如果忽视了影响其结果的因素,难免会造成假阴性或假阳性,因此,了解影响实验的因素,减少差错事故的发生是极其必要的。
素质因素
实验室人员的素质主要包括五个方面:思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。首先应具备一个良好的思想素质,因为我们的服务对象是人,我们的道德水平直接关系到人们的健康和生命安危,如果马马虎虎。三心二意,难免会有差错事故发生,我们应该热爱专业,耐心细致。在工作中如标本混淆、张冠李戴、报告单发错等都有可能造成严重后果;其次文化素质和技术素质,我们要熟练掌握本专业的基本理论和基本技术,认真学习新理论新知识,努力提高自己的业务水平,创造一个能够胜任本职工作的技术平台。良好的心理素质就是要勇于面对工作生活中的挫折,在繁忙工作中,有条不紊,冷静沉着的处理有关事务。人员素质问题是影响检验结果的首要因素。
标本处理因素
实验室人员收到标本后应认真查对,对不符合要求的标本和申请单要拘收,合格标本要及时分离血清,避免溶血,提取血清时不应混有大量纤维蛋白或细胞成分。对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱,做好原始记录,标本管上 标上待检者姓名、日期。从冰箱取出的标本要预温至室温,对冰冻的样品要融化好,并充分混匀再用。
注意事项编辑 播报
1、操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18 C~25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,要先查看水育箱温度,是否符合要求。
2、正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂,避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要清洗干净,避免污染,加样次序要与说明书一致,否则可导致结果错误,实验重复性差。
3、手工洗板加洗液时冲击力不要太大,洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数,洗液在反应孔内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孔间窜流,造成孔问污染,导致假阴性或假阳性。
4、要保证加液量一致 我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一,判断错误。
5、显色液量不可过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下,加显色系统后要避光反应,显色液量不能过多,以免显色过强。
6、试剂的影响因数:应选用有国家批准文号,质量靠得住的产品,不能图便宜,忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内,在使用时先平衡至室温,不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完,剩余的试剂下次用时应先检查是否变质,显色剂如被污染变色将造成全部显色,导致错误结果。过期的试剂不宜再用,若别无选择,应做好双份质控品的监测,确保结果的可靠性。
二、ELISA的类型ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:①固相的抗原或抗体,即“免疫吸附剂”(immunosorbent) ;②酶标记的抗原或抗体,称为“结合物(conjugate);③酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。