植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒

酶联免疫吸附实验 (ELISA) 是一种定性或定量检测，使用抗体来结合并测定目的分子。与其他免疫检测相似，可使用单克隆抗体和多克隆抗体来检测分析物（如肽、蛋白、抗体和小分子）。抗体对分析物产生特异性，并且一部分（如辣根过氧化物酶 [HRP]）直接或间接偶联抗体，从而提供检测方法并实现可能的信号放大。通过多种ELISA方法和检测化学成份，可以让终端用户调整适当的检测，以解决预计的实验问题。该方法可以用于单份样品检测或高通量筛选。

植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒

直接 ELISA

在直接 ELISA 中，抗原直接结合微孔板表面，随后添加直接偶联的抗体来结合/检测。简而言之，实验步骤的 步便是将抗原固定在微孔板上。 步是添加一种封闭试剂，防止检测抗体出现非特异性结合。接下来，添加直接偶联某种酶（如 HRP）的检测抗体。该检测抗体将结合抗原，并且剩余的抗体会从孔中洗掉。随后添加这种酶的底物，短暂孵育后，通常在一个读板机上测定每个孔的信号。直接 ELISA 的实验步骤有限，可让实验设置整体简化。

直接法优缺点：

优点：1：快速，仅使用一种抗体且步骤较少；2：消除了 抗体的交叉反应性。

缺点：1：一抗的免疫反应性可能受到酶或标签标记的不利影响；2：为每个特定的ELISA系统标记一抗，既费时又昂贵；3：由于标记的抗体密度较低导致较低的灵敏度；4：抗原的固定化不是特异性的，有较高背景干扰。

植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒

间接 ELISA

间接 ELISA 类似于直接 ELISA；但主要的差别在于会通过 偶联抗体来检测结合抗体。实验步骤的 步便是将抗原固定在微孔板上。 步是添加一种封闭试剂，防止结合抗体出现非特异性结合。第三，添加一种抗原特异性结合抗体，短暂孵育后，用缓冲液洗涤板孔，以去除多余的试剂。下一步是“间接”检测，其中添加一种抗体来检测 结合抗体。这种抗体通常偶联某种酶。在孵育和洗涤板孔之后，添加该酶的底物。随后，短暂孵育后，通常在一个读板机上测定每个孔的信号。 抗体通常是一种抗物种抗体。间接 ELISA 的主要优势在于可以使用偶联的 抗体来进行多个实验，前提是在所有不同的实验中使用相同物种的结合抗体。另一个优势是 抗体会放大信号，因为大约 2 个抗体将结合 抗体。随着步骤数量的增加，实验步骤通常会耗时更长，并且更容易出错。此外，背景信号可能会增强，因为所需的试剂数量更多，每一种都可能会出现非特异性结合。

间接法优缺点：

优点：1：可以在一个物种中制备许多一抗，并且可以将相同的标记二抗用于检测；2：由于没有标记，保留了 抗体的 免疫反应性；3：高标记的二抗密度可实现高灵敏度，从而导致信号放大。

缺点：1：二抗可能会发生交叉反应，从而导致非特异性信号；2：这个过程中需要一个额外的孵育步骤

植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒

夹心法 ELISA

在夹心 ELISA 中，抗原成为 2 种抗体之间的“三明治”中心。在一种夹心 ELISA 形式中， 抗体被吸收进入微孔板孔中，在洗涤和封闭后，添加含抗原的样品。添加会结合样品分子另一位点的 抗体。这种 抗体通常偶联某种酶，因此它可用来检测。洗涤板孔之后，添加该酶的底物。随后，短暂反应孵育后，通常在一个读板机上测定每个孔的信号。

夹心法优缺点：

优点：1：高特异性，使用的捕获抗体与检测抗体都是检测特异性的；2：适用于复杂样品，抗原不需要进行纯化即可用于检测；3：灵活性更大，灵敏度更高，可采用直接法也可采用间接法。

缺点：1：检测物需要拥有两个以上不同的抗原表位或多个相同的重复表位：2：价格较贵，时间消耗多。

植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒

竞争性ELISA

竞争性/抑制性 ELISA 也称封闭 ELISA，它对干扰预计信号的程度进行定量，以测定分析物的数量。这样做的一个方法是用一种对靶标有特异性的抗体包被平板。靶标可以偶联某种酶，并用于检测。如果实验含有次于 量的检测靶标，则高浓度的未标记靶标会竞争性地结合，从而减弱信号。这类竞争性实验可用来测定某种特异性分析物的水平。

竞争法优缺点：

优点：1：灵敏度高以及灵活性高；2：能测定微量的分析物。

缺点：1：特异性较低；2：需要酶标记的抗原。

植物过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒

洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
试剂盒组成
名称                96 孔配置         48 孔配置            备注
微孔酶标板       12 孔×8 条        12 孔×4 条          无
标准品              0.5mL               0.5mL             按说明书进行稀释
标准品稀释液      6mL                 3mL              按说明书进行稀释
样本稀释液         6mL                 3mL              按说明书进行稀释
检测抗体-HRP     6mL                 3mL                 无
20×洗涤缓冲液    20mL               20mL             按说明书进行稀释
底物 A              6mL                 3mL                  无
底物 B              6mL                 3mL                  无
终止液              6mL                 3mL                   无
封板膜              2 张                 2 张                  无
说明书              1 份                 1 份                  无
自封袋              1 个                 1 个                  无
操作步骤 
1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；
4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
免责声明
试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。
严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。