试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的:

本试剂盒用于测定样本中前丝聚蛋白PFLG的含量。

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中前丝聚蛋白PFLG水平。用纯化的前丝聚蛋白PFLG抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入前丝聚蛋白PFLG,和HRP标记的前丝聚蛋白PFLG抗原,使它们竞争结合,经过洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的前丝聚蛋白PFLG的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中前丝聚蛋白PFLG的含量。

试剂盒组成

规格:

96份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:2-8℃。

2.有效期:6个月

注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线， 做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请 乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

⑵ 结合物的定量测定 一般是对结合物中的酶和IgG进行定量测定。常用紫外分光光度计于403nm和280nm进行测定，然后按下列公式计算：
酶量（mg/ml）=OD403×0.42
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62
对于过碘酸钠氧化法制备的标记抗体量，按下列公式计算：
IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62
已知酶量和IgG量后，即可计算出标记抗体的摩尔（mol）比值。
HRP/IgG摩尔比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4
结合物中酶总量=HRP（mg/ml）×结合物溶液量
结合物产率=结合物中酶总量/标记时加入的酶量×
用于ELISA的结合物的酶量为400(g/ml时效果一般，为500(g/ml时效果较好，达 1000(g/ml时效果 。mol.比值由于结合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作为主要参数。一般认为mol.比值为0.7时效果一般，1.0时效果较好，1.5-2.0时 。酶结合率为 7%时效果一般，为9%－10%较好，达30%以上时 。

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