大鼠促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒

不同的实验中我们都会遇到封闭液，像常规的ELISA实验中封闭液也是不可缺少的，那让我们来看看哪些是ELISA实验中常见的吧！

ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理：

• ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用;
• 封闭液一般是BSA（牛血清白蛋白）、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶等或者是Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST等。
• 加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保护剂”的作用。
• 蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。

除此外，封闭剂还可用5%的脱脂乳，0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。

• SA是常用的封闭剂，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的， BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多的针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA、脱脂奶粉等封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭剂封闭。大部分BSA中有少量的抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，杂带较多或使得本底水平增高。
• 封闭血清的原理主要有两点，一是待检样本会有些与蛋白非特异性结合的物质，从而导致背景过高，因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合，从这点看，BSA和血清没有明显区别。二是待检样本中可能会有Fc受体，可以和抗体恒定区结合，与抗体特异性无关，封闭血清中有抗体，因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
• 脱脂奶粉的优点是价钱便宜，但是由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有,不能用于标记的抗体系统。
• 酪蛋白 和BSA作用类似，普通酪蛋白不易溶解。中性和碱性条件下带有负电性，与同样带负电荷胶体金之间存在排斥力，而膜一般都是带正电荷，会与酪蛋白有一定的吸附作用，用酪蛋白封闭效果好些。无蛋白化合物 甲醛：与PVDF膜表面的微结构反应或者结合，使之失去结合蛋白的疏水力或者空间结构域。去污剂(吐温-20)：Tween-20是一种非离子型去污剂，有复性抗原的作用，与膜疏水性吸附，有很强的对非特异性吸附的洗脱作用，同样可以可提高特异性的识别能力。

实验步骤

1. 酶标仪调色。把酶标仪打开，先调一下波长和灵敏度，保证仪器处于 状态。
2. 加样。用移液枪把样本加到酶标板孔里，注意不要加太多，大概十几微升就行。
3. 温育。把酶标板放到恒温箱里温育一段时间，让样本和试剂充分反应。
4. 洗板。把酶标板拿出来，用洗板机洗一下，把没反应的样本洗掉。
5. 加酶标抗体。再用移液枪把酶标抗体加到孔里，方法和加样本一样。
6. 再次温育。把酶标板再放到恒温箱里温育一段时间，让抗体和样本充分反应。
7. 洗板。还是用洗板机洗一下，把没反应的抗体洗掉。
8. 加显色液。把显色液加到孔里，然后放到恒温箱里温育一段时间。
9. 终止反应。显色液会随着时间逐渐产生颜色变化，可以通过终止液来结束反应。
10. 检测。把酶标板放到酶标仪里检测各孔的光密度值，记录数据。
大鼠促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒

大鼠促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒
ELISA试剂盒是一种常用的生物实验工具，用于检测样品中的特定蛋白质或抗体。在选择ELISA试剂盒时，需要考虑多个因素，以确保实验的准确性和可靠性。以下是选择ELISA试剂盒时需要考虑的几个要点。

1. 检测目标：首先需要确定要检测的目标是什么。是某种特定的蛋白质、抗体还是细胞因子？这将有助于选择正确的ELISA试剂盒。

2. 灵敏度和特异性：灵敏度是指试剂盒能够检测到的最小浓度，而特异性则是指试剂盒只对特定的目标产生反应的能力。在选择试剂盒时，需要考虑到样品的类型和浓度，以选择具有适当灵敏度和特异性的试剂盒。
3. 样品类型：不同的ELISA试剂盒适用于不同的样品类型，如血清、血浆、细胞培养上清液等。需要根据自己要检测的样品类型来选择合适的试剂盒。
4. 实验条件：不同的ELISA试剂盒需要在不同的条件下进行实验。例如，有些试剂盒需要在4摄氏度下保存，而有些则可以在室温下保存。在选择试剂盒时，需要考虑自己的实验条件和样品保存条件。
5. 价格和品质：价格和质量也是选择ELISA试剂盒时需要考虑的因素。一些高质量的试剂盒可能价格较高，但它们通常具有更好的性能和更可靠的结果。需要根据自己的预算和需求来选择合适的试剂盒。
6. 参考标准：在选择ELISA试剂盒时，建议参考国内外相关标准或 机构的认证。这可以确保所选试剂盒的准确性和可靠性。同时，也可以查看试剂盒的说明书或文献评价，了解其性能特点和使用注意事项。

大鼠促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒
总之，选择合适的ELISA试剂盒需要考虑多个因素，包括检测目标、灵敏度和特异性、样品类型、实验条件、价格和品质以及参考标准等。通过仔细比较不同试剂盒的特点和性能，可以确保选择到适合自己实验需求的ELISA试剂盒，从而获得准确可靠的实验结果。

大鼠促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒

操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以5才是样本最终浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。
7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
洗板方法
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
试剂盒组成
名称                96 孔配置         48 孔配置            备注
微孔酶标板       12 孔×8 条        12 孔×4 条          无
标准品              0.5mL               0.5mL             按说明书进行稀释
标准品稀释液      6mL                 3mL              按说明书进行稀释
样本稀释液         6mL                 3mL              按说明书进行稀释
检测抗体-HRP     6mL                 3mL                 无
20×洗涤缓冲液    20mL               20mL             按说明书进行稀释
底物 A              6mL                 3mL                  无
底物 B              6mL                 3mL                  无
终止液              6mL                 3mL                   无
封板膜              2 张                 2 张                  无
说明书              1 份                 1 份                  无
自封袋              1 个                 1 个                  无

大鼠促黄体生成激素(LH)酶联免疫试剂盒

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