Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题

（3）注意事项：酶标抗体的加入量要适宜；待测抗原要纯度高、效价稳定；洗涤时要充分，避免非特异性反应；特异性抗体的加入量要适宜；洗涤时要充分，避免非特异性反应。

二、Elisa实验标准操作方法

1. 加样：分别设空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔和待测样本孔。在对照孔中分别加入各试剂1滴，空白孔加满底物溶液/洗涤液。余孔分别加待测样品5滴入孔，接夹心法加生物素标记的抗体及亲和素溶液各5滴入孔。
2. 温育：用封口膜封板，37℃（或室温）温育30分钟。
3. 洗涤：用洗涤液洗3次，每次浸泡1-2分钟，摇30秒。最后一次甩干板芯。
4. 显色：每孔加底物溶液3滴和终止液一滴。37℃恒温箱显色是15分钟内观察结果。
5. 判定：自测底物显色为兰绿色，背景显色为黄色，阳性结果。无色为阴性结果。（注：浅兰和白色有区别吗？如果有区别则阳性结果为浅兰色）。

三、Elisa实验常见问题及解决方法

1. 实验结果重复性差
（1）原因：操作过程中出现误差、试剂盒质量差、试剂保存不当等。
（2）解决方法：严格按照操作步骤进行实验；选择质量好的试剂盒；正确保存试剂盒。

2. 实验结果出现假阳性或假阴性
（1）原因：样本中存在干扰物质；试剂盒质量差或过期等。
（2）解决方法：确保样本中没有干扰物质；选择质量好的试剂盒并注意其有效期。

3. 实验结果不准确或不灵敏
（1）原因：试剂盒中成分不纯或失效；实验操作不规范等。
（2）解决方法：确保试剂盒中成分纯度高且在有效期内；严格按照操作步骤进行实验。