ELISA试剂及溶液配制及实验步骤

一、试剂与溶液

1. 酶标板：ELISA实验常用的酶标板为96孔，每孔可加入100μl液体。在酶标板上方覆盖一层透明塑料膜，以减少空气污染。

2. 抗体：根据实验目的选择特异性抗体，一般使用的是多克隆抗体。

3. 酶标二抗：与抗体结合的酶标抗体，常用的有碱性磷酸酶（AP）、辣根过氧化物酶（HRP）等。

4. 底物：常用的底物为邻苯二胺（OPD）、对硝基苯磷酸酯（pNPP）等。

5. 终止液：常用的终止液为硫酸，可以终止酶促反应。

6. 洗涤液：用于清洗酶标板和微孔板，一般使用的是磷酸盐缓冲液（PBS）。

7. 抗体稀释液：用于稀释抗体，一般使用的是PBS。

8. 酶标二抗稀释液：用于稀释酶标二抗，一般使用的是含10%小牛血清的PBS。

9. 底物溶液：用于ELISA实验中的显色反应，一般使用的是OPD或pNPP底物溶液。

10. 终止液：用于终止ELISA实验中的显色反应，一般使用的是硫酸。

二、实验步骤

1. 加样：将待测样本、抗体、酶标二抗加入酶标板中，用封口膜封住酶标板，轻轻摇晃，使液体充分混匀。

2. 孵育：将酶标板置于37℃孵育一定时间，使抗原抗体充分结合。

3. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，去除未结合的抗体和酶标二抗。

4. 加底物：将底物溶液加入酶标板中，用封口膜封住酶标板，轻轻摇晃，使液体充分混匀。

5. 孵育：将酶标板置于37℃孵育一定时间，使底物与抗体结合。

6. 终止反应：用终止液终止显色反应。

7. 检测：用酶标仪检测各孔的光密度值，记录数据并进行分析。